La coltura tissutale (o micropropagazione) è una tecnica affascinante che permette di clonare piante partendo da piccolissimi pezzetti di tessuto. Fino a pochi anni fa era riservata ai laboratori, ma oggi è accessibile anche agli hobbisti, a patto di rispettare una regola d'oro: la sterilità assoluta.

Ecco una guida completa su ciò che ti serve per iniziare a costruire il tuo laboratorio casalingo.

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1. L'Ambiente di Lavoro (La "Clean Area")

 

Il nemico numero uno è la contaminazione (muffe e batteri). Non puoi farlo sul tavolo della cucina senza protezioni.

• SAB (Still Air Box): È l'alternativa economica alla cappa a flusso laminare. È una grande scatola di plastica trasparente con due buchi per le mani. All'interno l'aria è ferma, impedendo alle spore di cadere nel tuo lavoro.

  • Fai da te: Prendi un contenitore di plastica da 80-100 litri, fai due buchi, disinfetta tutto.

• Nebulizzatore spray: Riempito con alcool isopropilico al 70% (o etanolo) per disinfettare mani, pareti della SAB e strumenti.

 

2. Attrezzatura Hardware

 

Non serve spendere migliaia di euro, ma alcuni strumenti sono imprescindibili.

• Pentola a Pressione (Il tuo Autoclave): Serve per sterilizzare il terreno di coltura e gli strumenti.

  • Requisito fondamentale: Deve essere capace di raggiungere 15 PSI (circa 1,05 bar) per arrivare a 121°C. Molte pentole economiche arrivano solo a 10-11 PSI, che spesso non basta per uccidere tutte le endospore.

• Strumenti da taglio:

  • Manico per bisturi n. 3 o 4 con lame sterili monouso (n. 10 o 11 sono ottime).

  • Pinzette lunghe (20-30 cm): In acciaio inox, per maneggiare le piante dentro i barattoli senza toccarle.

• Contenitori per le piante:

  • Puoi usare barattoli di vetro (tipo omogeneizzati o marmellate) resistenti al calore. Il tappo deve avere un foro coperto da nastro microporoso (per far respirare la pianta senza far entrare batteri) o dischi filtranti sintetici.

  • In alternativa: contenitori in polipropilene (PP5) specifici per coltura tissutale.

 

3. Chimica e Consumabili (Il "Cibo")

 

Le piante in vitro non usano terra, ma un gel nutriente contenente tutto ciò che serve per vivere.

• Acqua Distillata: Mai usare acqua del rubinetto.

• MS Media (Murashige & Skoog): È la polvere base che contiene i macro e micronutrienti. Per iniziare, compra le buste "MS con Vitamine" premiscelate.

• Zucchero: Saccarosio (il comune zucchero da cucina bianco va benissimo). Le piante in vitro non fanno molta fotosintesi all'inizio, quindi "mangiano" lo zucchero.

• Gelificante: Serve a rendere solido il liquido.

  • Agar Agar: Il più economico e comune (uso 6-8g per litro).

  • Gellano (Gellan Gum): Più trasparente, ma a volte più costoso.

• Ormoni (Regolatori di crescita - PGR): Opzionali all'inizio, ma necessari per moltiplicare velocemente.

  • Citochinine (es. BAP): Stimolano la nascita di nuovi germogli.

  • Auxine (es. NAA o IBA): Stimolano le radici.

• PPM (Plant Preservative Mixture): Consiglio da pro: È un biocida ad ampio spettro che si aggiunge al terreno. Non danneggia le piante ma uccide batteri e funghi. Per un principiante, riduce drasticamente il tasso di fallimento.

 

4. Materiali per la Sterilizzazione degli Espianti

 

Prima di mettere un pezzo di pianta (espianto) nel barattolo sterile, devi "lavarlo" chimicamente.

• Candeggina (Ipoclorito di sodio): Quella classica, non profumata.

• Tween 20 (o sapone per piatti): Agisce come tensioattivo per far aderire meglio la candeggina alla pianta.

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Flusso di Lavoro Semplificato

 

Per darti un'idea di come userai questi materiali:

1. Preparazione: Mescoli acqua, polvere MS, zucchero e Agar. Scaldi finché l'Agar si scioglie.

2. Versamento: Versi il liquido nei barattoli (circa 2-3 cm di fondo).

3. Autoclave: Metti i barattoli chiusi e gli strumenti (pinzette/bisturi avvolti in alluminio) nella pentola a pressione per 20-40 minuti a 15 PSI.

4. Raffreddamento: Lasci che il gel si solidifichi.

5. Sterilizzazione Pianta: Prendi un rametto della tua pianta, lo lavi con acqua e sapone, poi lo immergi in una soluzione di acqua e candeggina (es. 10%) per alcuni minuti.

6. Inoculazione: Nella tua SAB (Scatola sterile), tagli il pezzetto di pianta "pulito" e lo infili nel gel sterile. Chiudi il barattolo.

7. Luce e Attesa: Metti il barattolo sotto luci LED (bianche fredde 6500K) a temperatura ambiente (22-24°C).

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Consigli per il primo acquisto

 

Se vuoi iniziare senza impazzire, ecco la "Lista della Spesa Minima":

Oggetto	Dove trovarlo	Note
Contenitore grande in plastica	Brico/Fai-da-te	Per fare la SAB
Pentola a Pressione	Amazon/Casalinghi	Controlla che arrivi a 15 PSI
Starter Kit Tissue Culture	Online (ego siti specializzati)	Spesso vendono kit con MS media, Agar e ormoni base
Bisturi e Pinzette lunghe	Amazon/Farmacia	Acciaio Inox
Barattoli piccoli	Supermercato	Vetro con tappo in metallo
Alcool Isopropilico 99%	Ferramenta/Online	Da diluire al 70% con acqua distillata

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